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文化媒體

1.培養(yǎng)基（Neurobasic®/B27®/GutaMAX）有多長™) 穩(wěn)定的

我們的培養(yǎng)基在4攝氏度的黑暗中保存長達6個月。為了防止氧化，介質(zhì)可以等分成更小的體積，并在4攝氏度下儲存。

2.我需要多長時間進行一次媒體交流？

我們每3到4天更換1/2的培養(yǎng)基，但這在一定程度上取決于細胞密度。請參閱INVITROGEN（LTI）焦點16:6。如果細胞密度高于500/mm2，則每2天改變1/2。

3.NbActiv1與NbActiv1有什么區(qū)別™ 和NbActiv4®？

NbActiv4®含有與NbActiv1相同的成分™ 加上固醇、雌激素和肌酸。NbActiv4®主要用作電生理介質(zhì)。

4.在對海馬培養(yǎng)物進行電鍍時，通常在NbActiv1中添加25μM氨酸鹽™ （Neurobasic®/B27®/谷氨胺最大殘留量™) 或NbActiv4®（Neurobasic®/B27®/GlustaMAX

™/固醇/雌激素/肌酸）培養(yǎng)至第4天。氨酸的用途是什么？

它有助于海馬神經(jīng)元的發(fā)芽和提高生存能力。DIV4之后，應使用不含氨酸的培養(yǎng)基進行半培養(yǎng)基交換。

5.如果氨酸鹽被排除在外，會有問題嗎？

在DIV4時，你的生存率會降低約30%。

6.如果我在NbActiv1中平板細胞™ 我可以將介質(zhì)更改為NbActiv4®嗎？

是的，在文化中的任何時候，媒體都可以從NbAcitv1改變™ 至NbActiv4®。然而，事實并非如此。接種NbActiv4®的細胞不應改為NbActiv1™.

7.我需要什么額外的用品來維持培養(yǎng)物？

每份訂單包括足夠的培養(yǎng)基，可以開始培養(yǎng)并維持4或5天。除此之外，您還需要更多的培養(yǎng)基，我們可以通過Invitrogen單獨提供完整的即用配方。您還需要您選擇的鍍膜玻璃或塑料基材，我們建議使用聚-D-賴氨酸作為基材。除此之外，您還需要解離溶液，我們推薦我們的木瓜蛋白酶和Hibernate®E-Ca以及火拋光移液管。我們將所有這些用品包含在我們的完整培養(yǎng)工具包中。

8.我應該在電鍍介質(zhì)中補充抗生素/抗真菌藥物嗎？例如：筆/鏈球菌/真菌唑還是大霉素？

我們通常在沒有抗菌抗生素和抗真菌藥物的情況下進行培養(yǎng)，并取得了良好的成功。這有三個優(yōu)點：

首先，當出現(xiàn)污染時，更容易確定污染的來源。第二，如果你使用抗生素，當你感染時，很難擺脫。第三，抗生素已被證明可以激活神經(jīng)元中的癲癇樣爆發(fā)活動?？股氐氖褂檬且环N常見的做法，其類型和濃度取決于最終使用者。

Hibernate®媒體

Hibernate®、Neurobasic®和B27®僅用于研究目的，由Invitrogen公司生產(chǎn)。Hibernate®、Neurobasic®和B27®是Invitrogen公司的商標。

1.Hibernate®媒體穩(wěn)定多長時間？

我們的Hibernate在4攝氏度的黑暗中保存長達1年。為了防止氧化，介質(zhì)可以等分成更小的體積，并在4攝氏度下儲存。

2.你總是添加B27®和GlutaMAX嗎™ 到Hibernate®，還是只在Hibernate®中保持細胞的活力？

幾乎總是這樣。請參閱Brewer和Price（1996）PM:8856709的圖1。在37℃的環(huán)境二氧化碳中，Neurobasic®/B27®/Gutamax中的LD50™ 為24小時，而在Hibernate®/B27®/GutaMAX®中則超過3天。

3.我們可以提供定制的Hibernate配方嗎？

是的，我們可以提供Hibernate的自定義配方。

4.Hibernate的其他用途包括：

轉基因小鼠基因分型過程中的腦儲存。

將腦組織運送給合作者。

基底

1.我的神經(jīng)元更多地以細胞簇或團塊的形式生長，而不是孤立的。怎么了？

這意味著細胞與自身的粘附比與基質(zhì)的粘附更緊密。最有可能的問題是基板制備不良。將您的方案與聚-D-賴氨酸的推薦制備和基質(zhì)涂層進行比較。另一種可能性是鍍層密度可能過高。

2.關于聚-L-賴氨酸與聚-D-賴氨酸，我認為使用聚-D-賴氨酸是因為如果它分解為賴氨酸時，D賴氨酸就不能被細胞使用。這是真的嗎？

這就是理論。在一些早期研究中（Brain Res.494:65（1989）），我們發(fā)現(xiàn)差異不大。

3.一些研究人員使用聚乙烯亞胺（PEI）代替聚-D-賴氨酸（PDL）。一個比另一個有優(yōu)勢嗎？

PEI比PDL便宜。我們在PEI方面沒有取得太大成功，但Mark Mattson在開始在Neurobasic®/10%血清中培養(yǎng)后一直在使用它。報告顯示，神經(jīng)元存活率或刺突率沒有顯著差異。

Soussou WV，Yoon GJ，Brinton RD，Berger TW（2007）在表面處理的多電極陣列上培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的神經(jīng)元網(wǎng)絡形態(tài)和電生理學。IEEE跨生物識別工程54:1309-1320。下午：17605362

Brewer GJ，Cotman CW（1989）海馬神經(jīng)元在低密度特定培養(yǎng)基中的存活和生長：三明治培養(yǎng)技術或低氧的優(yōu)勢。腦研究494:65-74。下午：2765923。

預涂PDL培養(yǎng)皿

1.你能推薦任何品牌的預涂層組織培養(yǎng)瓶或制備用于初級神經(jīng)元生長的組織培養(yǎng)瓶的方法嗎？

我們已經(jīng)確定，細胞培養(yǎng)塑料或玻璃上的聚-D-賴氨酸涂層在涂層后開始失效。涂層玻璃片在14天后失效，涂層塑料在10天后失效。我們懷疑一些預涂板的工作效果令人滿意，但我們的經(jīng)驗是，有幾種預涂板會導致初級神經(jīng)元的粘附性和存活率差。因此，我們建議您涂覆自己的基底，并在一周內(nèi)或上述幾天之后使用。

2.你們銷售預涂文化用品嗎？

是的，我們銷售PDL涂層燒瓶、井板和卡瓦。我們在一夜之間給它們涂上涂層，第二天再發(fā)貨，以便隔夜送達。我們建議您在一周內(nèi)使用這些產(chǎn)品。

新鮮紙巾

1.你們提供什么年齡的紙巾？

我們的標準組織是胚胎第18天或孕婦（3-4個月大）的成年組織。所有其他組織年齡均可特殊訂購，交貨期為2-3周。

Wolburg H，Neuhaus J，Kniesel U，Krauss B，Schmid EM，Ocalan M，Farrell C，Risau W（1994）血腦屏障內(nèi)皮細胞緊密連接結構的調(diào)節(jié)。組織培養(yǎng)、第二信使和共培養(yǎng)星形膠質(zhì)細胞的影響。《細胞科學雜志》107（第5期）：1347-1357頁。下午：1692329

Risau W，Engelhardt B，Wekerle H（1990）血腦屏障的免疫功能：

大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞的蛋白（自身）抗原。細胞生物學雜志110:1757-1766。下午：7929640關于從脊髓中分離運動神經(jīng)元的更多信息，M.Das、J.W.Rumsey、N.Bhargava、M.Stancescu和J.J.Hickman。一種確定的神經(jīng)肌肉接頭的長期體外組織工程模型。生物材料31（18）：4880-48882010。下午：20346499

2.你保證每個小瓶有多少來自皮層和海馬體的神經(jīng)元？

海馬神經(jīng)元的數(shù)量保證為100萬，皮層神經(jīng)元的數(shù)量則保證為200萬。其他組織類型的數(shù)量不同。

3.有什么保證可以保證動物的大腦和脊髓組織是根據(jù)美國國立衛(wèi)生研究院批準的方案獲得的？

我們的動物方案233-08-013于2020年7月4日獲得南伊利諾伊大學醫(yī)學院實驗動物護理和使用委員會的批準。

對于美國國立衛(wèi)生研究院的撥款，脊椎動物部分：

保證編號為A-3209-01。

F.脊椎動物

用于原代培養(yǎng)的海馬、皮層和其他大腦和脊髓神經(jīng)元將從胚胎或出生后早期的大鼠或小鼠的大腦中獲得。使用氟烷麻醉后，將對大腦進行解剖。戊比妥將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉狀態(tài)下被送上斷頭臺或折斷頸部。這些樂死方法與美國獸醫(yī)協(xié)會樂死問題小組的建議一致。

通過從動物身上分離神經(jīng)元，可以研究比整個動物研究更多的實驗變量，從而減少對動物的需求。大鼠和老鼠的大腦是所有動物大腦中研究得好的。

平均住房需求估計為2天，足以讓嚙齒動物從交通創(chuàng)傷中恢復過來。動物將由SIUSM實驗動物醫(yī)學中心護理，該中心經(jīng)AALAC認證，有10名工作人員，由Helen Valentine，D.V.M.，MS指導，經(jīng)DACLAM認證

使用氟烷麻醉后，將對大腦進行解剖。戊比妥將用于大鼠的心臟。小鼠將在麻醉狀態(tài)下被送上斷頭臺或折斷頸部。這些樂死方法與美國獸醫(yī)協(xié)會樂死問題小組的建議一致。因此，這些程序將動物的使用限制在進行有科學價值的研究時不可避免的范圍內(nèi)，并將動物的不適、痛苦和痛苦降至低。